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依诺肝素成环率检测中肝素酶的使用方法
Aglyco / 2015-01-06

依诺肝素是平均分子量为4500 Da的寡糖混合物。部分寡糖的还原端具有独特的1,6-酐环结构。1,6-酐环寡糖的摩尔百分比(成环率)是依诺肝素的关键指标之一。

以下是依诺肝素成环率检测中肝素酶的使用方法。若您购买的是1 IU/管的肝素酶,请收到后先分装为0.1 IU/管的规格。

按下表加入磷酸钾缓冲溶液到各管中,得到0.4 IU/mL的肝素酶稀释溶液。

需加入的缓冲液体积 稀释后的浓度
肝素酶I, 0.1 IU, 10 uL 240 uL 0.4 IU/mL
肝素酶II, 0.1 IU, 25 uL 225 uL 0.4 IU/mL
肝素酶III, 0.1 IU, 20 uL 230 uL 0.4 IU/mL

将稀释后的肝素酶溶液存放在冰箱中(-20 ℃)。

进行依诺肝素降解时,先将按上一步方法稀释得到的三种肝素酶溶液混合。移取100 uL肝素酶混合溶液,20 uL待测样溶液或标准品溶液,70 uL草酸钙/钠溶液。混合均匀,置于25 ℃水浴中孵育至少48小时。

本文提及的磷酸钾缓冲溶液和草酸钙/钠溶液可按照USP <207>配制。

有关肝素酶的更多信息,请参考肝素酶

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